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熒光顯微鏡的使用方法及注意事項(xiàng)

時(shí)間:2022-01-10 16:16:29 來(lái)源: 點(diǎn)擊:

  使用方法:

  (1)將材料板放在舞臺(tái)上。

  (2)打開(kāi)調(diào)節(jié)器熒光顯微鏡。然后按下并啟動(dòng)UV燈,不能在近15分鐘內(nèi)點(diǎn)燃,收盤(pán)后不能重啟3分鐘。

  (3)將激勵(lì)濾波器轉(zhuǎn)換為V,將分色器調(diào)整為V,選擇495或475nm阻塞濾波器。

  (4)用uvfl40.uvfl100熒光鏡檢查。

  (5)在載玻片上加入非熒光油,先用40X,再用100X聚焦顯微鏡檢測(cè)熒光。

  (7)由于紫外線(xiàn)熒光隨著時(shí)間的推移而增加,照射熒光物質(zhì)逐漸減弱,視野檢查應(yīng)不斷變化。

  (8)紫外FL10或紫外FL20也可用作低倍顯微鏡材料(使用低倍顯微鏡時(shí)不添加熒光油)。

  熒光圖像的記錄方法:

  熒光顯微鏡觀(guān)察到的熒光圖像具有形態(tài)特征、熒光顏色和亮度。判斷結(jié)果時(shí),必須結(jié)合判斷。結(jié)果是根據(jù)主觀(guān)指標(biāo)記錄的,即工人的眼睛。作為一般的定性觀(guān)察,基本上是。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,客觀(guān)指標(biāo)被用來(lái)記錄判斷結(jié)果,如使用細(xì)胞分光光度計(jì)、圖像分析儀等儀器。然而,這些文件記錄的結(jié)果也必須與主觀(guān)判斷相結(jié)合。

  熒光顯微鏡攝影是記錄熒光圖像的必要條件。由于熒光容易褪色和減弱,有必要記錄實(shí)時(shí)攝影的結(jié)果。該方法與普通顯微攝影方法基本相同。只需使用高速光敏膜,如ASA200或以上或24。以上。由于紫外線(xiàn)對(duì)熒光的猝滅效果很大,如熒光標(biāo)記物FITC,當(dāng)紫外線(xiàn)照射30s時(shí),熒光亮度降低50%,因此曝光速度太慢,無(wú)法捕捉熒光圖像。一般來(lái)說(shuō),熒光顯微鏡有半自動(dòng)或全自動(dòng)顯微攝影系統(tǒng)

  注:

  (1)熒光顯微鏡嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)要求制作,不改變程序。

  (2)檢查應(yīng)在暗室進(jìn)行。進(jìn)入暗室后,打開(kāi)電源,點(diǎn)燃超高壓汞燈5-15分鐘。當(dāng)光源發(fā)出強(qiáng)光并穩(wěn)定下來(lái)時(shí),眼睛有效地適應(yīng)暗室,然后開(kāi)始觀(guān)察標(biāo)本。

  (3)調(diào)節(jié)光源時(shí)戴防護(hù)眼鏡,防止紫外線(xiàn)損傷眼睛。

  (4)每次檢查時(shí)間為1~2小時(shí),超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸降低,熒光降低;紫外線(xiàn)照射3~5分鐘后熒光降低。因此,不超過(guò)2~3小時(shí)。

  (5)熒光光學(xué)顯微鏡使用壽命有限,檢查應(yīng)集中在樣品上,以節(jié)省時(shí)間,保護(hù)光源。天氣熱的時(shí)候要加冷卻風(fēng)扇,換燈泡的時(shí)候要開(kāi)始新的記錄時(shí)間。后燈可以點(diǎn)亮,然后熄滅,燈完全冷卻。一天幾次,避免火源。

  (6)染色后,熒光會(huì)隨著時(shí)間的推移而逐漸減弱。當(dāng)樣品在4℃下儲(chǔ)存在聚乙烯塑料袋中時(shí),可以延遲熒光衰減時(shí)間,防止密封劑蒸發(fā)。

  (7)熒光亮度的確定標(biāo)準(zhǔn):一般分為“1”-NO或可見(jiàn)弱熒光四個(gè)層次?!?+”-只能看到明顯的熒光?!?+)+”-可見(jiàn)明亮。

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